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締一生物生物科普:關(guān)于胎牛血清知識(shí)問答(二)

更新時(shí)間:2017-12-22  |  點(diǎn)擊率:1747

胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中受到很多實(shí)驗(yàn)人的青睞,今天小編把關(guān)于胎牛血清的保存使用做一個(gè)整理,希望對(duì)于初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)的你能夠有所裨益哦!

1、胎牛血清有必要做熱滅活嗎?  

答:實(shí)驗(yàn)顯示,胎牛血清是不需要做熱滅活的。

1)首先胎牛血清置于50℃以上的溫度長(zhǎng)達(dá)30分鐘是*沒有必要的。盡管如此,有些實(shí)驗(yàn)室還是把胎牛血清的熱滅活作為常規(guī)來執(zhí)行。事實(shí)上, 熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì),但是在胎牛血清中對(duì)補(bǔ)體的滅活則明顯沒有必要。2Triglia和Linscott曾對(duì)商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測(cè)定,他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1,C6僅達(dá)成年動(dòng)物血清的1-3%,而其它補(bǔ)體成分僅有成年動(dòng)物的5-50%,至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化。又有研究結(jié)果證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對(duì)細(xì)胞的促粘附作用。3)此外,熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來負(fù)面的影響,對(duì)血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生,導(dǎo)致很多營(yíng)養(yǎng)因子的損失。因此,胎牛血清已無需再滅活。

總之,經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),或*沒有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)”,常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量

 

2、細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?  

答:一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài),黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染,微生物則會(huì)大量繁殖,培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞,生長(zhǎng)狀態(tài)良好,與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比,沒有任何變化。

那么,黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過老,破碎的細(xì)胞殘骸;(2)血清質(zhì)量不好,反復(fù)凍融的結(jié)果;(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細(xì)胞生長(zhǎng);(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格。可應(yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點(diǎn);(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn),可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。 

有著“細(xì)胞搭檔”贊譽(yù)的Ausbian胎牛血清,早已在各大實(shí)驗(yàn)室悄然流行。2014年,Ausbian血清商標(biāo)已在中國(guó)商標(biāo)局注冊(cè),目前此商標(biāo)屬上海締一生物生物科技有限公司*所有。Ausbian血清目前在中國(guó)市場(chǎng)主要為澳洲血源的產(chǎn)品,廣泛應(yīng)用于中科院、醫(yī)科院、軍科院、細(xì)胞庫(kù)、北大、清華、復(fù)旦、浙大等科研院所及大學(xué)的重點(diǎn)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。

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