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方便雙歧桿菌計數(shù)的顯色培養(yǎng)基

更新時間:2019-05-08  |  點擊率:1661

近年來,雙歧桿菌作為益生菌,越來越得到人們的重視。一方面,在生產(chǎn)中,需要進行雙歧桿菌的培養(yǎng),另一方面,在酸乳等食品乳品中,又需要雙歧桿菌的計數(shù)。因為雙歧桿菌只有活菌數(shù)達到10CFU/mL以上時,才能發(fā)揮正常生理功能;數(shù)量太少,則達不到保健的效果。

 

在培養(yǎng)雙歧桿菌時,需要了解雙歧桿菌為專性厭氧菌,適宜生長的環(huán)境pH值為6.7~7.0。它為革蘭氏陽性,無運動性,包括至少25個種,適合生長溫度在25℃-45℃。雙歧桿菌對碳水化合物的代謝終產(chǎn)物為乳酸和醋酸。

 

雙歧桿菌原本可以作為指示菌,因為它在糞便中出現(xiàn)的頻率非常高。有人研究發(fā)現(xiàn),嬰兒出生后母乳喂養(yǎng)一周,腸道中雙歧桿菌數(shù)可占92%,而健康成年人僅有10%。但雙歧桿菌生長緩慢,且嚴格厭氧,培養(yǎng)很不方便,因此并沒有作為糞便的指示菌。

 

當今食品發(fā)展的趨勢是,應用雙歧桿菌越來越多,且乳桿菌與雙歧桿菌同時添加。這種混合發(fā)酵,多見于酸奶與保健品。在酸奶中,常應用嗜熱鏈球菌與保加利亞乳桿菌在牛奶中發(fā)酵 , 以使產(chǎn)品具有酸奶特有的細膩圓潤的凝乳狀態(tài)。而如果只單一使用雙歧桿菌發(fā)酵,則風味與口感不佳。但混合發(fā)酵也帶來一個問題,即給雙歧桿菌的計數(shù)帶來麻煩。一方面,雙歧桿菌與乳桿菌都屬于乳酸菌,性能接近,另一方面,雙歧桿菌隨著傳代次數(shù)增多,會發(fā)生變異成桿狀,因此通過鏡下形態(tài)鑒別不太可靠。如果能有一款商品化的雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基,則可給雙歧桿菌的鑒別和計數(shù)帶來極大的便捷。

 

世界微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)商HiMedia開發(fā)有一款雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基(品名:HiCrome™
Bifidobacterium Agar),它可用于雙歧桿菌與乳桿菌混合發(fā)酵的酸乳等制品菌落的鑒別計數(shù)。該顯色培養(yǎng)基中含有特別蛋白胨、牛奶蛋白、氯化鈉、顯色劑和瓊脂。牛奶蛋白能檢測雙歧桿菌的酪蛋白水解活性,從而使菌落表現(xiàn)出光暈。顯色劑則可鑒別乳桿菌和雙歧桿菌。乳桿菌屬通常表現(xiàn)為綠色菌落和霧狀背景(發(fā)酵乳桿菌例外,菌落為粉色,無光暈),雙歧桿菌則根據(jù)物種不同,菌落顏色也有所區(qū)別:嬰兒雙歧桿菌表現(xiàn)為深藍色至藍綠色菌落。短雙歧桿菌表現(xiàn)為粉紅色菌落,并且有光暈。據(jù)了解,雙歧桿菌在成人體內(nèi)的菌種主要是青春雙歧桿菌和長雙歧桿菌。在嬰兒為嬰兒雙歧桿菌和短雙歧桿菌。

圖. 右上為嬰兒雙岐桿菌ATCC 25962,左上為短雙歧桿菌ATCC 15698,下為植物乳桿菌ATCC 8014

 

雙歧桿菌在許多制品以及人和動物腸道內(nèi),大多與其他菌(如乳酸菌)混合生長,而且生長特點相近,很難區(qū)分。要對其進行計數(shù),需設計特定的選擇培養(yǎng)基。雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基一方面要求能保證雙歧桿菌的生長,同時要求選擇性高,對雜菌的抑制性強,雙歧桿菌菌落呈現(xiàn)顯著的顏色或形態(tài)上的特征。傳統(tǒng)培養(yǎng)雙歧桿菌培養(yǎng)時間較長,需要 96小時才能出結果,而該顯色培養(yǎng)基則只需在無氧條件下35-37℃孵育48小時,即可知道準確結果。顯色培養(yǎng)方法的特異性也很高,能夠保證培養(yǎng)結果的準確性。

 

HiCrome™
雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基能快速有效地檢測雙歧桿菌,這對于辨別產(chǎn)品中添加雙歧桿菌的數(shù)量具有重要意義。HiCrome™
雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基能實現(xiàn)一步培養(yǎng)直接計數(shù),基本能夠滿足實驗室對雙歧桿菌初步檢測計數(shù)的需要,特別適合不擁有大型細菌鑒定儀的中小企業(yè)和第三方實驗室。

 

 

圖. 短雙歧桿菌

 

 

圖. 植物乳桿菌

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