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梭菌顯色培養(yǎng)基(膜過濾法)

更新時間:2020-03-02  |  點擊率:1012

梭菌顯色培養(yǎng)基(膜過濾法)

M-CP Agar Base

 

貨號

產(chǎn)品

規(guī)格

價格

M1354

梭菌顯色培養(yǎng)基

M-CP Agar Base

100g(1.4L)

500g(7.0L)

詢價

FD153

添加劑1

M-CP Selective Supplement I

5管(2.5L)

詢價

FD154

添加劑2

M-CP Selective Supplement II

5管(2.5L)

詢價

FD154A

改良的添加劑2

M-CP Selective Supplement II, Modified

5管(2.5L)

詢價

 

 

應(yīng)用

用于歐盟指導(dǎo)委員會推薦的對水樣中產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離和計數(shù)(采用膜過濾法)(3)

 

背景

產(chǎn)氣莢膜梭菌是一種革蘭氏陽性芽孢桿菌,是人畜共患病原菌,也是人畜腸道正常菌群,它廣泛存在于自然環(huán)境如土壤、糞便和污水中(1)。產(chǎn)氣莢膜梭菌分為五個亞型,其中一些亞型能分泌外毒素。產(chǎn)氣莢膜梭菌作為條件致病菌,可導(dǎo)致水和食品污染,引發(fā)畜禽和人類疾病,如壞死性腸炎、腹瀉、腸毒血癥、氣性壞疽和食物中毒

有報道指出,大腸菌群作為水質(zhì)微生物學(xué)指標(biāo)是不可靠的,而產(chǎn)氣莢膜梭菌可作為一個水污染的指示菌。歐洲已將其作為水質(zhì)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的補充條款,WHO已在水質(zhì)檢測中將其作為水質(zhì)污染的微生物。產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量與水污染程度有一定的相關(guān)關(guān)系。我國《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗方法》GB8538—2016規(guī)定,天然礦泉水產(chǎn)品和水源水需檢測產(chǎn)氣莢膜梭菌。

目前,檢測產(chǎn)氣莢膜梭菌多采用培養(yǎng)基法和PCR法。實踐證明,采用快速膜過濾技術(shù)和顯色培養(yǎng)基(mCP培養(yǎng)基),簡單、易行、可靠。

 

原理

M-CP平板是根據(jù)Armon和Payment的配方而成(2)。培養(yǎng)基中的胰蛋白?、酵母粉提供氮源營養(yǎng),蔗糖提供碳源營養(yǎng)。溴甲酚紫為pH指示劑。吲哚β-D-葡萄糖苷為β-D-葡糖苷酶或纖維二糖酶的顯色底物,二磷酸酚酞用于檢測酸性磷酸化酶。添加的D-環(huán)絲氨酸和多粘菌素B(FD153)抑制伴隨的其他菌群。厭氧環(huán)境也提供了進(jìn)一步的選擇性。當(dāng)黃色(纖維二糖酶陰性)菌落在暴露于氨煙30秒后變?yōu)槊倒寮t時,即可認(rèn)為是產(chǎn)氣莢膜梭菌。顏色鑒別有時是困難的,因此,可挑取典型菌落(黃變粉色)和非典型菌落(綠色或沒變色)進(jìn)行驗證。驗證試驗可通過硫還原、革蘭氏陽性、芽孢桿狀、無動力性、硝還原、明膠液化、乳糖發(fā)酵和其他生化試驗證實(4)。

 

培養(yǎng)基組分

 

成分

g/L

胰蛋白?

30.000

酵母粉

20.000

蔗糖

5.000

L-鹽酸半胱氨酸

1.000

7水硫酸鎂

0.100

溴甲酚紫

0.040

6水氯化鐵

0.090

吲哚β-D-葡萄糖苷

0.060

瓊脂

15.000

 

pH值為7.6±0.2(25℃)

 

配制

35.6g干粉溶485ml蒸餾水。加熱煮沸使培養(yǎng)基全溶。15磅121℃高壓滅菌15分鐘。冷卻至45-50℃。用5ml無菌蒸餾水溶解添加劑1(貨號:FD153),用10ml無菌蒸餾水溶解改良的添加劑2(貨號:FD154A),將添加劑2(貨號:FD154)室溫孵育。在485ml無菌溶解冷卻的梭菌顯色培養(yǎng)基溶液中,無菌加入1管添加劑1(貨號:FD153),1管添加劑2(貨號:FD154)或改良的添加劑2(貨號:FD154A),混勻,倒入無菌平皿。

 

質(zhì)量控制

外觀:淡黃至淡綠色松散粉末。

成膠性:牢固,與1.5%瓊脂凝膠相當(dāng)。

成品顏色和透明度:紫色透明至輕微不透明凝膠。

pH值:7.40-7.80

培養(yǎng)反應(yīng):在無氧條件下加入添加劑后,43-45℃孵育18-24小時,觀察接種反應(yīng)。

 

有機(jī)體

接種(CFU)

生長

回收率

前一個批次的回收率

磷酸化酶試驗

產(chǎn)氣莢膜梭菌ATCC 12924

50-100

好-旺盛

≥50%

≥70%

陽性,黃色菌落*

產(chǎn)氣莢膜梭菌ATCC 13124

50-100

好-旺盛

≥50%

≥70%

陽性,黃色菌落*

產(chǎn)氣莢膜梭菌ATCC 10543

50-100

好-旺盛

≥50%

≥70%

陽性,黃色菌落*

產(chǎn)氣莢膜梭菌ATCC 12916

50-100

好-旺盛

≥50%

≥70%

陰性,藍(lán)色菌落

雙酶梭狀芽胞桿菌NCTC 506

50-100

好-旺盛

≥50%

≥70%

陰性,藍(lán)色菌落

傷寒沙門氏菌ATCC

6539

≥103

抑制

0%

0%

0%

金黃色葡萄球菌ATCC 25923

≥103

抑制

0%

0%

0%

大腸桿菌ATCC

25922

≥103

抑制

0%

0%

0%

大腸桿菌ATCC

8739

≥103

抑制

0%

0%

0%

 

暴露于氨煙30秒后菌落變?yōu)榘得倒迳恋奂t色。

 

儲存

2--8

  

 

參考文獻(xiàn)
1. Czeczulin J. R., Hanna P. C., Mcclane B. A., 1993, Infect. Immun., 61: 3429-3439.

2. Armon R. and Payment P., 1988, Can. J. Microbiol., 34:78-79.

3. Directive of the Council of the European Union 98/83/EC

4. Sartory D. P., Field M., Curbishley S. M., Pritchard A. M., 1998, Lett. Appl. Microbiol., 27:323-327.

 

產(chǎn)品引用文獻(xiàn)

1. Kadam, A.M., et al., Pathogen removal from municipal wastewater in constructed soil filter.Ecological Engineering, 2008. 33(1): p. 37‐44.

2. Raed S. Al‐Wasify, A.‐S.A. Al‐Sayed, and M.M. Kamel, Sensitivity and Specificity of Chromogenic Media for Detection of Some Pathogens in Water. International Journal of Environment and Sustainability, 2013. 2(1): p. 1‐9.

 

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