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支原體PCR驗(yàn)證用標(biāo)準(zhǔn)品,認(rèn)準(zhǔn)MB產(chǎn)品

更新時(shí)間:2020-10-13  |  點(diǎn)擊率:922

支原體PCR方法在上已得到歐洲、日本和美國藥典的承認(rèn),它可以取代支原體經(jīng)典藥典方法(如培養(yǎng)法、DNA染色法),但前提是方法需要進(jìn)行驗(yàn)證。在這方面,國內(nèi)藥典尚無明確說明,但相關(guān)權(quán)wei機(jī)構(gòu)在一些不同場合和法規(guī)指南中表示,將逐步與接軌,如果核酸法經(jīng)過驗(yàn)證,保證其足夠的靈敏度、特異性和耐用性,則也認(rèn)可。

 

國內(nèi)尚不能大規(guī)模推廣核酸法主要有兩個(gè)瓶頸:一是國內(nèi)缺乏參比標(biāo)準(zhǔn)品。而且支原體是滅活的,級別至少有10CFU,如果再有100CFU則更好。二是企業(yè)仍需要用自己的樣本基質(zhì)進(jìn)行PCR的方法學(xué)驗(yàn)證,這樣增加了一定的難度。另外,支原體的DNA抽提也是一個(gè)必要的過程,難以統(tǒng)一化。


事實(shí)上,對支原體PCR或qPCR方法進(jìn)行驗(yàn)證,除了可參考試劑盒生產(chǎn)廠家自身的驗(yàn)證外(盡管它不能*替代用戶自己的驗(yàn)證,但可提供特異性驗(yàn)證的一些信息,如使用哺乳動物細(xì)胞DNA、某些細(xì)菌菌屬DNA等,而不必使用者自己再去嘗試),用戶自己主要是對方法的檢測限和耐用性進(jìn)行驗(yàn)證,這里常用的就是10CFU支原體標(biāo)準(zhǔn)品。100CFU標(biāo)準(zhǔn)品可作為一個(gè)補(bǔ)充。

 

德國MB廠家集20多年支原體防控檢測領(lǐng)域的經(jīng)驗(yàn),開發(fā)有一系列的相關(guān)產(chǎn)品,包括支原體核酸法驗(yàn)證用標(biāo)準(zhǔn)品。其10CFU標(biāo)準(zhǔn)品為滅活支原體凍干粉形式,經(jīng)精que標(biāo)定。所用支原體培養(yǎng)基符合歐洲醫(yī)藥管理局標(biāo)準(zhǔn)。支原體為滅活形式,不會帶來污染,同時(shí)凍干粉又保證了產(chǎn)品的穩(wěn)定性,不會受溫度波動的影響。

 

每批支原體都會提供CFU與基因拷貝數(shù)的比值,以方便二者的換算。因?yàn)?0CFU只能確定PCR能夠達(dá)到的檢測限在10CFU以下,但無法具體確定靈敏度的數(shù)值。帶DNA拷貝數(shù)標(biāo)定的基因組DNA標(biāo)準(zhǔn)品則可進(jìn)一步確定檢測限的數(shù)值。而且核酸法終檢測的對象是核酸,而產(chǎn)品的QC主要關(guān)注的是支原體,核酸的存在是側(cè)面反映支原體存在的一個(gè)指標(biāo)。CFU與基因拷貝數(shù)的比值很好地對二者進(jìn)行了關(guān)聯(lián)。

 

MB的支原體標(biāo)準(zhǔn)品批次均經(jīng)廠家QC合格后方能出廠,包括其Ct值達(dá)到一定要求。另需注意的是,100CFU標(biāo)準(zhǔn)品不能按倍數(shù)稀釋為10CFU標(biāo)準(zhǔn)品。因支原體在液相中不是均一分布,而大多呈集聚狀態(tài)。因此按倍數(shù)稀釋后,會造成支原體量上的偏差。

 

德國MB的支原體菌株來自英國菌種保藏中心(NCTC),均有ATCC編號。支原體傳代次數(shù)少,發(fā)生突變幾率低。而且經(jīng)廣泛引用和認(rèn)可,部分如下:

 

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