av一区二区三区不卡在线看,精品国精品国产应用久,精品欧美一区二区三区精品久久,久久久久久久久欧美精品

當(dāng)前位置:首頁  >  技術(shù)文章  >  新guan病毒檢測的另一靶點(diǎn),助力病毒研究

新guan病毒檢測的另一靶點(diǎn),助力病毒研究

更新時(shí)間:2020-11-06  |  點(diǎn)擊率:998

目前新guan病毒在疫苗研發(fā)和基礎(chǔ)領(lǐng)域獲得了更大的關(guān)注。許多新guan病毒的檢測都針對的是ORF1ab和N基因或E基因,但本文介紹的是新guan病毒的另一個(gè)靶點(diǎn)RdRp基因(即RNA依賴性RNA聚合酶基因),用于病毒的檢測,它不用于診斷,只用于研究。

 

一、新guan病毒RT-qPCR引物/探針(套裝)(英文名:SARS-CoV-2 Confirm,用于定性檢測和分析guan病毒RNA。它包括3個(gè)成分:

 

橙蓋: 2019-nCoV Mix(凍干粉),1管。

此管為新guan病毒引物/探針,可特異性擴(kuò)增新guan病毒的RdRp基因(即RNA依賴性RNA聚合酶基因),而其他冠狀病毒RNA不會(huì)被檢測到【1】【2】。(該引物/探針依據(jù)WHO診斷參考實(shí)驗(yàn)室公布的新guan病毒引物/探針序列而設(shè)計(jì)【1】。

如要檢測其他冠狀病毒,推薦MB公司提供的其他冠狀病毒引物/探針,品名:CoV Screen (without ConviFlex™ RT-Taq Mix),貨號(hào):271-1100。

綠蓋: Positive Control RNA(陽性對照RNA,凍干粉),1管。

此陽性對照RNA為一段合成的RNA序列(序列來自武漢的病毒株)。

白蓋: PCR Grade Water(液體),1管。

 

二、使用前,橙蓋和綠蓋先用PCR級(jí)水(白蓋)復(fù)溶,并分裝,避免反復(fù)凍融。

該引物/探針應(yīng)與MB公司提供的【RNA病毒檢測試劑盒】(英文名:ConviFlex™RT-Taq Mix)一起使用,用于新guan病毒RT-qPCR反應(yīng)檢測。

 

三、檢測樣本需為抽提過的RNA樣本。

 

四、新guan病毒的靶基因RdRp是用FAM™通道檢測,擴(kuò)增的人RNA酶P基因(過程對照)用ROX™通道檢測,用以評估樣本的制備質(zhì)量。

 

五、該方法有三處特別的地方:

1. 靶點(diǎn)特別。依據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn),此引物探針為新guan病毒RdRp基因,而非市面上常見的ORF1ab和N基因或E基因。

2.陽性對照RNA為一段合成的RNA序列(序列來自武漢的病毒株)。

3. 主要組分為凍干粉,4℃保存,儲(chǔ)存運(yùn)輸方便,性能穩(wěn)定。

4. 適用于科研中,各種來源的RNA樣本,包括拭子、活檢組織、哺乳動(dòng)物細(xì)胞和細(xì)菌等。

 

 

六、操作注意事項(xiàng):

 

該引物/探針應(yīng)僅由經(jīng)過培訓(xùn)的實(shí)驗(yàn)室人員使用。

始終穿合適的防護(hù)fu一次性手套。

根據(jù)樣品類型,應(yīng)謹(jǐn)慎處理所有樣品。請遵循WHO推薦的方法處理樣本。

該試劑盒不含有害物質(zhì)。 殘余物可以根據(jù)當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)丟棄。

 

七、操作步驟:

步驟1. 試劑制備

橙蓋2019-nCoV Mix引物探針凍干粉,大速離心5秒鐘,加入525μl PCR級(jí)水(白蓋),室溫靜置5分鐘后,渦旋并離心5秒鐘,分裝,待用或-18℃保存。

綠蓋Positive Control RNA陽性對照凍干粉,大速離心5秒鐘,加入105μl PCR級(jí)水(白蓋),室溫靜置5分鐘后,渦旋并離心5秒鐘,分裝,待用或-18℃保存。

 

步驟2. RT-qPCR引物/探針mix制備(20μl 反應(yīng)體積)

(1)1個(gè)反應(yīng)需要加入:酶預(yù)混液 (自備的紅蓋預(yù)混液)10μl ,

橙蓋(復(fù)溶的2019-nCoV Mix引物/探針)5μl 

(紅蓋預(yù)混液 來自MB公司的【RNA病毒檢測試劑盒】(RT-qPCR法),

英文名:ConviFlexRT-Taq Mix, 貨號(hào)192-0025/-0100/-0250,需單獨(dú)購買)

 

(2)將以上引物/探針mix渦旋混勻,并離心5秒鐘。

 

(3)每個(gè)PCR管中加入15μl上述引物/探針mix和5μl樣本(抽提后的RNA),

或5μl RNA提取試劑盒中的洗脫緩沖液,作為陰性對照或5μl PCR級(jí)水作為無模板對照,或5μl陽性對照RNA

 

(4)緊扣PCR管,然后短暫離心。

 

(5)將PCR管放置qPCR儀上,緊上頂蓋。

 

步驟3. 設(shè)置qPCR程序

1個(gè)循環(huán): 55 ℃,10分鐘

1個(gè)循環(huán): 94 ℃,3 分鐘

45個(gè)循環(huán)94 ℃,15秒

58℃,30秒  

 

步驟4. 啟動(dòng)程序

 

步驟5. 數(shù)據(jù)解讀

FAM 通道

ROX 通道

說明

陽性

陽性

檢測到SARS-CoV-2 RNA

陽性

陰性

檢測到SARS-CoV-2 RNA

陰性

陽性

未檢測到SARS-CoV-2 RNA

陰性

陰性

樣品制備有問題

 

八、使用注意事項(xiàng):

 

  • 使用前應(yīng)認(rèn)真閱讀說明書。
  • 來自不同批次的試劑不能混合。
  • 試劑盒內(nèi)的試劑應(yīng)始終作為一個(gè)整體溶解分裝。
  • 試劑盒應(yīng)在效期內(nèi)使用。
  • 每次PCR至少應(yīng)設(shè)置一個(gè)陽性對照。每次PCR至少應(yīng)設(shè)置一個(gè)陰性對照和/或一個(gè)無模板對照。如果實(shí)驗(yàn)者自己抽提RNA,則可使用洗脫緩沖液作為陰性對照。對照必須與待測樣品的處理方式相同。您也可能需要其他實(shí)驗(yàn)室提供的對照品,例如含高、中、低不同濃度的RNA樣品。使用對照,對于確認(rèn)結(jié)果的可靠性或用于排除故障非常有意義。
  • 建議在無RNA和DNA污染的條件下進(jìn)行RT-PCR,以避免操作過程中DNA或非特異RNA的交叉污染。(MB公司推薦使用PCR污染祛除噴霧,英文名:PCR Clean™,貨號(hào)15-2025,預(yù)先清潔實(shí)驗(yàn)環(huán)境。)
  • 盡量減少RNA樣品的凍融次數(shù),同時(shí)避免RNA酶污染,以減少RNA降解的風(fēng)險(xiǎn)。(RNA降解會(huì)極da地限制了RT-qPCR反應(yīng)的性能)。請確保高質(zhì)量的完整RNA用于檢測。
  • 樣本制備過程中,注意避免其他DNA污染,DNA的干擾也會(huì)降低qPCR的準(zhǔn)確性。

 

九、參考文獻(xiàn)

1. Corman VM, Bleicker T, Brünink S, Schneider J, Drosten C. Diagnostic detection of 2019-nCoV by real-time RT-PCR. 

2. Corman VM, Landt O, Kaiser M, Molenkamp R, Meijer A, Chu DKW, Bleicker T, Brünink S, Schneider J, Schmidt ML, Mulders DGJC, Haagmans BL, van der Veer B, van den Brink S, Wijsman L, Goderski G, Romette JL, Ellis J, Zambon M, Peiris M, Goossens H, Reusken C, Koopmans MPG, Drosten C. Detection of 2019 novel coronavirus (2019-nCoV) by real-time RT-PCR. Euro Surveill. 2020 25(3). doi: 10.2807/1560-7917.ES.2020.25.3.2000045.

 

  

 

 

久久网址一区二区精品视频-日产国产欧美视频一区精品| 亚洲欧洲一区二区福利-亚洲欧美日韩高清中文| 国语自产偷拍精品视频偷拍-国产伊人这里只有精品视频| 天天干天天天天天天天-亚洲综合av在线三区| mm在线精品视频在线观看-欧美国产日韩在线一区二区三区| 欧美精品午夜一二三区-a屁视频一区二区三区四区| 十九禁止观看无码视频-亚洲国产激情福利专区| 哦啊好大用力欧美视频-麻豆国产传媒片在线观看| 国产精品成人欧美激情-黄色床上完整版高清无遮挡| 亚洲一区精品一区在线观看-日本久久久一区二区三区| 久久精品亚洲国产av久-国产精品视频一区二区免费| 亚洲另类熟女国产精品-懂色一区二区三区在线播放| 少妇一区二区三区粉嫩av-国产精品区久久久久久久| 亚洲国产精品日韩欧美-国产又粗又硬又大爽黄| 亚洲av专区在线观看国产-丰满人妻av一区二区三区| 亚洲欧洲成视频免费观看-国产福利一区二区在线观看| 精彩亚洲一区二区三区-中文字幕中文字幕在线色站| 一区二区三区国产高清mm-美女张开腿让帅哥桶爽| 亚洲av综合av一区东京热-黄页免费视频网站在线观看| 国产精品久久99精品毛片-国产四季高清一区二区三区| 亚洲产国偷v产偷v自拍性色av-亚洲欧美日韩国产三区| 韩漫一区二区在线观看-精品国产免费未成女一区二区三区| 国产成人精品亚洲精品密奴-国产成人AV无码精品| 精品少妇一区二区18-一区二区三区日韩在线播放| 欧美一区二区三区调教视频-三上悠亚国产精品一区二区三区| 欧美伦乱淫老妇女激情吧-亚洲女邻居精品二区久久| 国产精品中出久久久蜜臀-久久久中国精品视频久久久| 91大神国内精品免费网站-亚洲免费电影一区二区| av网址在线直接观看-黄色av全部在线观看| 黄色91av免费在线观看-欧美黄片一级在线观看| 亚洲欧美日韩国产一区二区三区-国产欧美日韩一区二区免费| 欧美mv日韩mv视频-熟妇人妻ⅴa精品中文| 午夜福利卫生纸福利院-一区二区三区久久亚洲| 日韩综合精品一区二区-丝袜美腿熟女人妻经典三级| 亚洲美女喘息呻吟的网站-国产免费一区二区三区三洲| 青青操大香蕉在线播放-国产亚洲欧美精品在线观看| 精品少妇一区二区18-一区二区三区日韩在线播放| 精品一区二区三区av在线-欧美黑人巨大精品一区二区| 中文字幕人妻少妇第一页-隔壁的女孩在线看中文字幕| 欧美三级韩国三级日本三斤-日本不卡一区不卡二区| 日本亚洲精品中字幕日产2020-很黄很黄的裸交视频网站|