av一区二区三区不卡在线看,精品国精品国产应用久,精品欧美一区二区三区精品久久,久久久久久久久欧美精品

當(dāng)前位置:首頁  >  技術(shù)文章  >  qPCR檢測(cè)支原體方法略述

qPCR檢測(cè)支原體方法略述

更新時(shí)間:2020-11-09  |  點(diǎn)擊率:899

和PCR比起來,qPCR不用跑膠,實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增狀況,操作更為便捷。下面以德國(guó)MB Venor®GeM支原體檢測(cè)試劑盒(qPCR一步法)Venor®GeM qOneStep)為例,略述檢測(cè)原理和過程。

 

   該試劑盒包括4管試劑,其中2管分別為緩沖液和PCR水,另2管為主要試劑。1管即mix,含引物、核苷酸、聚合酶、熒光素標(biāo)記的探針和內(nèi)部擴(kuò)增對(duì)照。另1管為陽性對(duì)照,均為凍干粉。

 

它通過擴(kuò)增高度保守的rRNA操縱子,或者更準(zhǔn)確地說,擴(kuò)增支原體基因組中的16S rRNA編碼區(qū),可以特異性地檢測(cè)支原體。在520nm(FAMTM通道)檢測(cè)支原體特異性擴(kuò)增片段。在610nm(HEXTM通道)檢測(cè)內(nèi)部擴(kuò)增對(duì)照的擴(kuò)增。它能特異性檢測(cè)所有導(dǎo)致細(xì)胞污染的柔膜體物種。真核DNA不會(huì)被擴(kuò)增。通過內(nèi)部對(duì)照,可檢測(cè)PCR抑制劑的存在或不正確的DNA提取引起的假陰性結(jié)果。樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清液。檢測(cè)程序可在3小時(shí)內(nèi)完成。

在檢測(cè)前,樣本需要一定的制備。具體是將100μl細(xì)胞培養(yǎng)上清液轉(zhuǎn)移至無菌的1.5 ml反應(yīng)管中。關(guān)上蓋子扣緊。將樣品在95°C下孵育5分鐘。以大速度短暫離心樣品(15秒)以沉淀任何細(xì)胞碎片。然后可直接取2μl上清液進(jìn)行qPCR。

 

qPCR反應(yīng)體系一共是25ul,其中樣本2ul,其余是master mix。注意設(shè)置陽性對(duì)照、陰性對(duì)照(無模板對(duì)照)。

 

如果檢測(cè)的Ct<40,則表明PCR結(jié)果陽性。如果檢測(cè)的Ct≥40,則PCR反應(yīng)結(jié)果為陰性。如果FAM陽性,則支原體陽性。如果FAM陰性,HEX也陰性,表明PCR擴(kuò)增出了問題,需要重做。如果FAM陰性,HEX陽性,表明支原體確實(shí)陰性。

 

PCR擴(kuò)增出了問題主要原因?yàn)镻CR反應(yīng)被抑制了,可能需要考慮做DNA抽提。

 

在qPCR反應(yīng)中,引物和探針的設(shè)計(jì)尤為重要,它既需要覆蓋大多數(shù)支原體,又需要不與細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。當(dāng)然,Taq酶的性能也很重要,因?yàn)镈NA的擴(kuò)增終依賴于酶的活性和擴(kuò)增的速度。從這個(gè)角度說,一個(gè)好的qPCR試劑盒是各個(gè)因素共同作用的結(jié)果。

国产一级片久久免费看同-麻豆精品尤物一区二区青青| 欧美视频在线观看国产专区-亚洲91精品在线观看| 女主播啪啪大秀免费观看-精品99午夜福利影院| 国产一级片久久免费看同-麻豆精品尤物一区二区青青| 国产精品v欧美精品v日韩精品-国产欧美日韩精品区一区二污污污| 欧美亚洲另类久久久精品-国产精品一区二区亚洲推荐| 91蜜桃传媒一二三区-日韩欧美国产一区呦呦| 日本亚洲精品中字幕日产2020-很黄很黄的裸交视频网站| 日韩av电影一区二区网址-老熟妇仑乱视频一区二| 国产欧美日本一区二区-一区二区三区亚洲在线播放| 中文字幕亚洲中文字幕-丰满老妇伦子交尾在线播放| 97人妻精品一区二区三区爱与-日韩精品亚洲专区在线观看| 亚洲另类自拍唯美另类-99国产精品兔免久久| 亚洲国产欧美日韩不卡-熟妇激情一区二区三区| 日韩毛片在线免费人视频-超碰中文字幕av在线| 久久网站中文字幕精品-三级精品久久中文字幕| 91麻豆免费在线视频-欧美中文天堂在线观看| 国产欧美日韩精品一区在线-久久精品视频免费获取地址| 一区二区三区国产高清mm-美女张开腿让帅哥桶爽| 女主播啪啪大秀免费观看-精品99午夜福利影院| 久久精品亚洲国产av久-国产精品视频一区二区免费| 日韩精品中文在线观看一区-亚洲bt欧美bt精品| 欧美mv日韩mv视频-熟妇人妻ⅴa精品中文| 九九热这里只有精品九九-欧美日韩人妻精品一二三| 日韩精品一区二区三区十八-日韩人妻少妇一区二区三区| 亚洲美女喘息呻吟的网站-国产免费一区二区三区三洲| 免费av一区在线观看-国产精品视频高潮流白浆视频免费| 成人av一区二区蜜桃-亚洲色图激情人妻欧美| 黄色美女网站大全中文字幕-欧美韩国日本一区二区| 一区二区三区女同性恋-熟妇高潮一区二区高清网络视频| 亚洲欧美激情自拍色图-国产亚洲精品sese在线播放| av噜噜国产在线观看-欧美视频亚洲视频一区二区三区| 欧美日韩黑人在线播放-51在线精品免费视频观看| 中文字幕人妻少妇第一页-隔壁的女孩在线看中文字幕| 蜜臀一区二区三区精品在线-99久久久精品免费看国产| 成人免费黄色在线网站-日韩精品一区二区三区四区在线| 亚洲午夜久久久精品影院-性感美女在线观看网站国产| 欧美精品一区二区不卡-精品国产一区二区三区香蕉网址| 欧洲精品一区二区三区中文字幕-91久久国产综合久久蜜月精品| 久久免费观看归女高潮特黄-黄色av一本二本在线观看| 亚洲欧美另类综合偷拍-婷婷社区综合在线观看|