細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指的是細(xì)胞在體外條件下的生長(zhǎng)，在培養(yǎng)的過程中細(xì)胞不再形成組織（動(dòng)物）。

培養(yǎng)物是單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞群。細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)都要生活在人工環(huán)境中，由于環(huán)境的改變，細(xì)胞的移動(dòng)或受一些其他因素的影響，培養(yǎng)時(shí)間加長(zhǎng)，傳代導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)單一化型。

優(yōu)點(diǎn)

1.直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生命活動(dòng)。用于細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)和腫瘤學(xué)等多種學(xué)科研究.

2.直接觀察細(xì)胞的變化可便于攝影。

3.研究細(xì)胞種類如低等到高等到人類、胚胎到成體、正常組織到腫瘤。

4.便于使用各種技術(shù)：相差、熒光、電鏡、組化、同位素標(biāo)記等方法觀察和研究細(xì)胞狀況。

5.是分子生物學(xué)和基因工程學(xué)的研究對(duì)象，也是其主要的組成部分。

6.易于施用物理、化學(xué)生物的實(shí)驗(yàn)研究。

7.易于提供大量生物性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象,耗資少比較經(jīng)濟(jì)。

8.成為生物制品單克隆抗體生產(chǎn)和基因工程等的材料來源。

缺點(diǎn)

組織和細(xì)胞離體后獨(dú)立生存在人工的培養(yǎng)環(huán)境中，雖然模擬體內(nèi)環(huán)境，仍有很大差異。 因而利用培養(yǎng)細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)時(shí)，不應(yīng)視為體內(nèi)細(xì)胞*相同，把實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)體內(nèi)，輕易做出與體內(nèi)等同的結(jié)論。

具體步驟

1.細(xì)胞復(fù)蘇

將凍存細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動(dòng)促進(jìn)其融化。將融化的細(xì)胞移入離心管中，加入37oC預(yù)熱的DMEM*培養(yǎng)基中（其中胎牛血清約為10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。

加入DMEM*培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，制成細(xì)胞懸液，接種于培養(yǎng)皿/瓶中，在含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.細(xì)胞傳代

當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%（過早產(chǎn)量不足，過晚細(xì)胞狀態(tài)不佳，1:2至1:10以上的比率傳代培養(yǎng)，一般1:3至1:5細(xì)胞一代，即從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時(shí)間，非細(xì)胞有絲分裂次數(shù)）時(shí)，去掉*培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。

加入胰蛋白酶（注意：消化液的量以蓋住細(xì)胞最好，最佳消化溫度是37oC。顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時(shí)細(xì)胞消化適度）進(jìn)行消化，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中約2-3min。

加入適量DMEM*培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM*培養(yǎng)基清洗，棄上清液。

加入DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后按照所需細(xì)胞量在含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

3.細(xì)胞凍存

當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí)，去掉*培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶進(jìn)行消化，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中約2-3min。加入DMEM*培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM*培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入lml凍存液（90%胎牛血清，10% DMSO。 一般來講血清含量可以在10%-90%之間調(diào)整，凍存液中加入血清一方面可以為細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)，另一方面可以在細(xì)胞凍存過程中提供非滲透性保護(hù)物質(zhì)，如蔗糖，白蛋白等從而更好地保護(hù)細(xì)胞），放入凍存管內(nèi)（管內(nèi)有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入4oC冰箱中凍存30min，然后放入-20oC冰箱中凍存30min，再置于-80℃冰箱內(nèi)過夜。

第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放人液氮，可以保存三個(gè)月。

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的原則是：慢凍速融，這樣更加有利于保持細(xì)胞的活力。凍存細(xì)胞不加任何保護(hù)劑，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生，從而使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機(jī)械損傷，引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓，PH，電解質(zhì)等的改變，進(jìn)而促使細(xì)胞死亡。

科研實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好，就要用好血清，如Ausbian®特級(jí)胎牛血清，它適合各種細(xì)胞培養(yǎng)，尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞，如：干細(xì)胞、肝細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。