自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell，NK)：

是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，不僅與抗腫瘤、抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生。一般認(rèn)為NK細(xì)胞直接從骨髓中衍生，其發(fā)育成熟依賴于骨髓的微環(huán)境。NK細(xì)胞的殺傷活性無(wú)MHC限制，不依賴抗體。

m6A甲基化修飾：

甲基化，是指從活性甲基化合物上將甲基催化轉(zhuǎn)移到其他化合物的過(guò)程，可形成各種甲基化合物，或是對(duì)某些蛋白質(zhì)或核酸等進(jìn)行化學(xué)修飾形成甲基化產(chǎn)物。

N6-腺苷酸甲基化（m6A）是mRNA最常見的內(nèi)部修飾之一。通俗點(diǎn)講，當(dāng)腺苷酸的第六位N處發(fā)生甲基化時(shí)，就是我們所說(shuō)的m6A。RNA的m6A甲基化一共有大三類酶參與：

甲基化轉(zhuǎn)移酶（Writers）

去甲基化酶（Erasers）

甲基化閱讀蛋白（Readers）

m6A甲基化修飾調(diào)節(jié)mRNA的剪接、翻譯和穩(wěn)定性，從而影響細(xì)胞的分化、增殖和凋亡。

m6A甲基化與NK細(xì)胞的關(guān)系

近年來(lái)，越來(lái)越多的科學(xué)家將目光投向免疫系統(tǒng)中，m6A甲基化修飾的作用。但是，該甲基化對(duì)NK細(xì)胞的影響和調(diào)控卻尚不清楚。

近日，有科研人員對(duì)此進(jìn)行了研究。

研究結(jié)果表明：

m6A“writer"METTL3在腫瘤浸潤(rùn)的NK細(xì)胞中的表達(dá)下降，并且METTL3的蛋白表達(dá)水平與NK細(xì)胞中的效應(yīng)分子呈正相關(guān)。

NK細(xì)胞中METTL3缺失會(huì)改變NK細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)，抑制NK細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中的浸潤(rùn)和功能，導(dǎo)致小鼠腫瘤發(fā)展加速，生存期縮短。

編碼SHP-2的基因經(jīng)過(guò)m6A修飾，其蛋白在METTL3缺失的NK細(xì)胞中表達(dá)減少。SHP-2活性的降低使NK細(xì)胞對(duì)IL-15的反應(yīng)降低，這與mettl3缺失NK細(xì)胞中AKT和MAPK信號(hào)通路激活的抑制有關(guān)。

這些結(jié)果表明，m6A甲基化保護(hù)了NK細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)和腫瘤免疫監(jiān)控功能。

實(shí)驗(yàn)小結(jié)

該研究涉及到多個(gè)實(shí)驗(yàn)，小鼠模型、細(xì)胞分離培養(yǎng)、細(xì)胞系構(gòu)建、細(xì)胞純化、甲基化測(cè)定、免疫組化、ELISA、RT-qPCR、免疫印跡，mRNA-seq等。

其中細(xì)胞培養(yǎng)是基礎(chǔ)，RT-qPCR也是關(guān)鍵步驟之一。

細(xì)胞的培養(yǎng)離不開血清的支持，優(yōu)質(zhì)的血清在為細(xì)胞提供充足營(yíng)養(yǎng)的同時(shí)，又可以大程度地減少外源的干擾，例如內(nèi)毒素等對(duì)細(xì)胞有影響的物質(zhì)。

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而像qPCR這樣精細(xì)的實(shí)驗(yàn)，DNA污染很難*清除。即使只有一個(gè)污染的DNA分子被檢測(cè)到，也會(huì)使整個(gè)PCR檢測(cè)過(guò)程出現(xiàn)誤差。

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