當(dāng)培養(yǎng)的細胞增殖達到一定密度后，將會出現(xiàn)密度抑制現(xiàn)象，表現(xiàn)為細胞的生長和分裂速度逐漸減慢，甚至停止。此時如果不及時進行分裝再培養(yǎng)，即傳代培養(yǎng)，細胞將逐漸走向衰老、死亡。將培養(yǎng)的細胞從一個容器以1∶2或其他比率轉(zhuǎn)移到其他容器中擴大培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。貼附型生長細胞采用酶消化傳代法，而懸浮型生長細胞則采用直接傳代法或離心傳代法，以下將分別加以介紹。

實驗操作

以貼壁細胞培養(yǎng)為例

1、穿好細胞房專用的實驗服，戴好滅菌手套和口罩。

2、從培養(yǎng)箱中取出細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿（Tip1：一般選擇處于對數(shù)期的細胞），用75%酒精消毒外包裝后轉(zhuǎn)移至到超凈臺中。

3、打開蓋子（Tip2：如果是培養(yǎng)皿，只需打開一個縫隙即可，避免污染），輕輕吸出舊的培養(yǎng)液，加入適量PBS緩沖液洗滌1-2次（Tip3：注意從未培養(yǎng)細胞的側(cè)壁加入，以免沖掉細胞），棄去PBS緩沖液。

4、用移液器加入適量胰酶（Tip4：具體量根據(jù)實驗需要確定，提前將胰酶37℃預(yù)熱，效果更好），蓋好蓋子，“十字"晃動，使胰酶充分接觸細胞。

5、將加入胰酶的細胞培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到倒置顯微鏡載物臺，鏡下觀察細胞消化情況，當(dāng)細胞變圓且大量脫落時，準(zhǔn)備終止消化（Tip5：若初始的細胞密度比較高，加入胰酶后，肉眼也可觀察到細胞脫落，當(dāng)細胞有一半左右脫落時，即可終止消化，避免反復(fù)將培養(yǎng)皿拿出超凈臺，避免增加污染的風(fēng)險），用75%的酒精噴灑培養(yǎng)瓶表面，轉(zhuǎn)移到超凈臺。

6、用移液器加入等量含血清培養(yǎng)基，終止消化。移液器充分且柔和地吹打，避免產(chǎn)生氣泡，使細胞*脫落。

7、將培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中混合液體轉(zhuǎn)移至離心管中（離心管規(guī)格根據(jù)實驗需要確定），配平后離心3-5分鐘左右（離心機轉(zhuǎn)速根據(jù)細胞種類而定，常見的有1000-3000rpm/min）。

8、離心好后，用酒精噴壺噴灑離心管表面，轉(zhuǎn)移進超凈臺，打開蓋子，將上清液倒入廢液缸。

9、加入適量體積含血清培養(yǎng)基，用移液器或巴氏吸管輕輕吹打，制成細胞懸液。

10、將細胞懸液分裝進2個（或多個）潔凈滅菌培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，加入適量培養(yǎng)基，蓋好蓋子。

11、將分裝好的培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡載物臺，觀察細胞情況，細胞應(yīng)保證一定數(shù)量，數(shù)量太少會影響生長情況。

12、在培養(yǎng)瓶上做標(biāo)記，注明傳代時間，細胞種類，操作人員等信息。在放入培養(yǎng)箱之前應(yīng)再次用酒精噴一噴培養(yǎng)瓶表面，然后應(yīng)記得整理操作臺，用75%酒精擦拭超凈臺臺面，清理廢液和垃圾。

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