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一招教你如何遠(yuǎn)離支原體污染

更新時間:2022-09-22  |  點擊率:899

在疫苗生產(chǎn)、生物制藥,細(xì)胞免疫,Car-T,以及基礎(chǔ)科研過程中的細(xì)胞培養(yǎng)試驗,支原體污染的預(yù)防和祛除,是保證生產(chǎn)質(zhì)量和實驗順利的重要環(huán)節(jié)。

往期文章,已經(jīng)為大家介紹了『支原體檢測』的常規(guī)方法,其中包括熒光定量PCR方法的檢測試劑盒,以及可做方法學(xué)驗證的標(biāo)準(zhǔn)品等。

本期文章,我們將進(jìn)一步、多角度的介紹『支原體祛除和預(yù)防』的常見簡便方法,希望對疫苗生產(chǎn)、生物制藥、細(xì)胞學(xué)研究等項目的質(zhì)檢質(zhì)控有所幫助。

關(guān)于整個細(xì)胞培養(yǎng)過程中支原體祛除與預(yù)防,我們將從以下三個方面展開:

一、工作區(qū)域中支原體祛除與預(yù)防

支原體可以說是“無處不在",稍有不慎,環(huán)境中那些對細(xì)胞有害的支原體,很容易污染培養(yǎng)體系。

因此,應(yīng)將支原體的清除與預(yù)防,日常實驗室工作區(qū)域的清潔、維護(hù)過程中。

除了正確穿戴實驗防護(hù)用具外(如:口罩、細(xì)胞培養(yǎng)室專用實驗服、鞋套等),還應(yīng)定期*清潔工作區(qū)域:用新捷爾滅等稀釋液進(jìn)行墻面、地面的噴灑和擦拭。對于桌面、實驗臺面以及擺放了儀器設(shè)備的地方,應(yīng)選用針對性更強的支原體祛除預(yù)防試劑。

Minerva Biolabs Mycoplasma-off™就是一個不錯的選擇。該噴霧劑/濕巾中含有支原體專用殺除劑Mynox®,可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體,而且對葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等微生物也有比較好的清除效果。

Mycoplasma-off™安全性高,沒有腐蝕性和致癌性成分,相比起其他消毒成分,將人體和實驗儀器設(shè)備的消毒風(fēng)險降至更低。

即用型消毒液,可以快速簡單地保持工作區(qū)的清潔干凈。

二、細(xì)胞培養(yǎng)體系中支原體祛除與預(yù)防

在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實驗時,如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長緩慢、甚至大量漂浮、細(xì)胞培養(yǎng)液提前變黃等情況,請務(wù)必警惕,有可能就是中了支原體的招。

對于珍貴的細(xì)胞株,我們往往希望可以拯救一下,首先可以用PCR/qPCR方法檢測細(xì)胞是否被支原體污染。

如細(xì)胞株已發(fā)生污染,采取以下三種方法處理,能在盡可能短的時間,高效祛除支原體,并有一定的預(yù)防能力

1、Zell Shield®支原體祛除劑(培養(yǎng)基用)

適用范圍

  • 細(xì)胞已發(fā)生支原體污染,但又不愿丟棄,希望繼續(xù)培養(yǎng)(如已轉(zhuǎn)染或大量擴增的細(xì)胞)。

  • 初始培養(yǎng)的原代細(xì)胞。

  • 存在支原體污染高風(fēng)險的細(xì)胞。

用法

  • 1:100加入培養(yǎng)基。

  • 當(dāng)細(xì)胞存在支原體污染時,應(yīng)先對細(xì)胞懸浮沖洗三次,再用含Zell Shield®培養(yǎng)基培養(yǎng)。每次傳代前都應(yīng)做懸浮沖洗處理。連續(xù)傳代4次,支原體即可祛除。

2、Mynox® Gold支原體祛除劑(珍貴細(xì)胞保種用)

適用范圍

被支原體污染的珍貴細(xì)胞或不易獲得的生物樣本(如細(xì)胞種子)。

用法

  • 將「首CI治療液」加入到4.5ml培養(yǎng)基(FBS需≤5%)中,培養(yǎng)細(xì)胞(細(xì)胞數(shù)為104~105)。

  • 細(xì)胞長至80%-90%匯合時,細(xì)胞傳代。將1管「鞏固防護(hù)液」加到9.5ml培養(yǎng)基中,用該培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

  • 重復(fù)步驟2,細(xì)胞再傳代2次,支原體即*祛除。

注意:每次傳代時,最好都能把細(xì)胞懸浮沖洗三次,可取得更好的治療效果。

3、Mynox®支原體祛除劑(珍貴樣本用)

適用范圍

被支原體污染的珍貴細(xì)胞、不易獲得的生物樣本或病毒收獲液(特別是不能長期培養(yǎng)的樣品)。

用法

對于貼壁細(xì)胞:

  • 培養(yǎng)皿中加入200μl Mynox®和 2.8ml培養(yǎng)基中(FBS≤5%),混勻。

  • 再加入2ml細(xì)胞(細(xì)胞數(shù)為10^4~10^5,培養(yǎng)基中的FBS需≤5%)。

  • 細(xì)胞培養(yǎng)2小時,棄上清,換用新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)4代即可。

對于懸浮細(xì)胞:

  • 在離心管中加入200μl Mynox®和1.6ml胰酶(0.125 %,5 mM EDTA in PBS),混勻。

  • 加入1.6ml細(xì)胞(細(xì)胞數(shù)為10^4~10^5)。

  • 室溫靜置30min。

  • 低速離心5min。棄上清,換用新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)4代即可。

三、水浴鍋、水箱等支原體祛除與預(yù)防

水浴鍋、細(xì)胞培養(yǎng)箱中的水槽,也容易變?yōu)楦黝愇廴咀躺臏卮?。保持水槽的潔凈,對?xì)胞培養(yǎng)的順利進(jìn)行非常重要。因此在進(jìn)行清潔時,不要忘記水浴鍋、水槽等地方。

這里推薦大家使用支原體祛除劑(水槽用)——Water Shield™。

Water Shield™可持續(xù)作用4周,使水源避免受到支原體、細(xì)菌、真菌、霉菌、孢子的污染。且不含醛類或疊氮化物,對細(xì)胞無毒害。

使用起來也十分便捷,Water Shield™與無菌水按1:200比例,直接加入水中,使用方便,使用后不產(chǎn)生水垢


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