我們常說(shuō)，細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，在選購(gòu)血清的時(shí)候，一定要看檢測(cè)報(bào)告，關(guān)注上面一些很重要的指標(biāo)。比如病毒、內(nèi)毒素這些。

不難理解，血清中如果有：病毒存在，不僅細(xì)胞養(yǎng)不好，實(shí)驗(yàn)人員的安全也會(huì)受到威脅。

那這血清中內(nèi)毒素的高低對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)有啥影響?。繛槭裁催x血清要選內(nèi)毒素含量低的呢？

所以今天我們就來(lái)聊聊，細(xì)胞培養(yǎng)中血清的內(nèi)毒素問(wèn)題。

內(nèi)毒素是個(gè)啥？

內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的一種成分，叫做脂多糖。脂多糖對(duì)宿主是有毒性的。內(nèi)毒素只有當(dāng)細(xì)菌死亡溶解或用人工方法破壞后才釋放出來(lái)，所以叫做內(nèi)毒素。

人體對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素極為敏感。

極微量（1-5ng/kg，而1ng≈2.5EU）內(nèi)毒素就能引起體溫上升，發(fā)熱反應(yīng)持續(xù)約4小時(shí)后逐漸消退。

自然感染時(shí)，因革蘭氏陰性菌不斷生長(zhǎng)繁殖，同時(shí)伴有陸續(xù)死亡、釋出內(nèi)毒素，故發(fā)熱反應(yīng)將持續(xù)至體內(nèi)病原菌全部消滅為止。

內(nèi)毒素引起發(fā)熱反應(yīng)的原因是內(nèi)毒素作用于體內(nèi)的巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等，使之產(chǎn)生IL-1、IL-6和TNF-α等細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子作用于宿主下丘腦的體溫調(diào)節(jié)中樞，促使體溫升高發(fā)熱。

由于內(nèi)毒素是細(xì)菌死亡裂解或自溶引起的，因此環(huán)境中大量存在內(nèi)毒素。但是如果在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，出現(xiàn)了大量?jī)?nèi)毒素，可不是一件好事。

內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞有啥影響？

此前，有人做過(guò)實(shí)驗(yàn)，來(lái)觀察內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響，記錄的影響包括：刺激白細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生組織因子、激活鼠巨噬細(xì)胞，以及通過(guò)極低水平（低于 1 ng/ml）的內(nèi)毒素抑制鼠類紅細(xì)胞集落形成等一系列指標(biāo)。

隨后，發(fā)表了許多關(guān)于內(nèi)毒素對(duì)體外細(xì)胞功能和生長(zhǎng)影響的論文。

細(xì)胞種類濃度(ng/mL)內(nèi)毒素的效應(yīng)

馬巨噬細(xì)胞0.5誘導(dǎo)產(chǎn)生 IL-6

人體外受精胚胎細(xì)胞1體外受精成功率降低了 3-4 倍

主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞10硫酸肝素蛋白聚糖出現(xiàn)劑量依賴性改變

鼠 B 淋巴瘤10免疫球蛋白輕鏈的產(chǎn)量增加 30-40 倍

重組CHO細(xì)胞10改變蛋白質(zhì)生產(chǎn)

心肌細(xì)胞10誘發(fā)收縮功能障礙

人T細(xì)胞100在單核細(xì)胞存在下誘導(dǎo)增殖和淋巴因子產(chǎn)生

尿道上皮細(xì)胞5000改變克隆效率

Morris等人發(fā)現(xiàn)，只需暴露 6 小時(shí)，低至 0.5 ng/mL 的內(nèi)毒素水平可以顯著增加馬腹膜巨噬細(xì)胞中IL-6的產(chǎn)生。Mattern等人發(fā)現(xiàn)， 100 ng/mL 內(nèi)毒素可以刺激人類 T 細(xì)胞的增殖及其淋巴因子的產(chǎn)生，但這種刺激需要與先前暴露于內(nèi)毒素的單核細(xì)胞直接物理接觸。Sibley等人報(bào)道，10 到 200 ng/mL 內(nèi)毒素刺激鼠 B 細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系 (70Z/3) 完成 IgM 的產(chǎn)生，然后在細(xì)胞表面表達(dá)。

基于上述證據(jù)，很明顯，內(nèi)毒素對(duì)每種細(xì)胞的影響是不一樣。接下來(lái)我們就看看產(chǎn)生這些影響的機(jī)制有哪些。

內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞有啥影響？

關(guān)于內(nèi)毒素與細(xì)胞培養(yǎng)物相互作用的機(jī)制仍有很多未知。

有一些研究報(bào)道：

在血清中發(fā)現(xiàn)了一種 60 kDa 的糖蛋白 LPS 結(jié)合蛋白 (LBP)，它通過(guò)脂質(zhì) A 結(jié)構(gòu)域與 LPS 結(jié)合，大大增強(qiáng)了與免疫系統(tǒng)細(xì)胞相互作用的能力。這種增強(qiáng)似乎需要特定的 55 kDa 糖蛋白受體來(lái)輔助配合。這種蛋白可以膜錨定再多種免疫細(xì)胞上，當(dāng)與 LPS-LBP 結(jié)合時(shí)，會(huì)啟動(dòng)一系列事件，導(dǎo)致細(xì)胞因子 mRNA 的產(chǎn)生和隨后細(xì)胞釋放多種細(xì)胞因子，但細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)究竟是如何發(fā)生的尚不全部清楚。

LPS 也可能通過(guò)其他方式與細(xì)胞相互作用。一些缺乏 CD14 受體的細(xì)胞已被證明可以受到 LPS 的影響。LPS 可能通過(guò)未知受體、內(nèi)吞作用或直接進(jìn)入細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞 。Risco 等人證明 LPS 可以與細(xì)胞骨架微管結(jié)合，并在高濃度下抑制微管聚合。這種結(jié)合是LPS 的某些細(xì)胞毒性作用的一種可能機(jī)制，但作用似乎不涉及細(xì)胞因子激活。

從現(xiàn)有的研究可以看出，內(nèi)毒素對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)影響還是很大的：

改變細(xì)胞外形

活化細(xì)胞，產(chǎn)生訊息傳遞物質(zhì)

抑制酶活性

抑制人工受精的成功率等

內(nèi)毒素過(guò)高，有事甚至?xí)苯痈淖兾覀兊膶?shí)驗(yàn)結(jié)果。所以要盡量避免內(nèi)毒素的干擾。

一般來(lái)說(shuō)，細(xì)胞或組織培養(yǎng)過(guò)程中內(nèi)毒素污染源通常來(lái)自于血清、培養(yǎng)液及外加藥物配制用水等。

所以選擇內(nèi)毒素含量低的血清就顯得尤為重要。

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