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支原體檢測(cè),測(cè)的是什么?上清 or 細(xì)胞?

更新時(shí)間:2023-08-25  |  點(diǎn)擊率:455

在細(xì)胞治療、疫苗生產(chǎn)等領(lǐng)域,藥物在上市前,需要通過(guò)支原體檢測(cè),證明生產(chǎn)過(guò)程中沒(méi)有支原體的污染。一般情況下,支原體附著在細(xì)胞表面,因此,在檢測(cè)前,收集細(xì)胞后,保留上清,用于后續(xù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。

 

德國(guó)MB公司生產(chǎn)的Venor®GeM qEP試劑盒設(shè)計(jì)用于定量檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物和其他生物基質(zhì)中的支原體, 該試劑盒是基于實(shí)時(shí)或定量PCR (qPCR),作為快速,穩(wěn)健和敏感支原體的,可替代《藥典》種傳統(tǒng)方法的檢測(cè)手段。

 

該檢測(cè)針對(duì)支原體基因組中的一個(gè)高度保守區(qū)域,以檢測(cè)歐洲藥典第2.6.7(EP 2.6.7)、日本藥典第G3(JP G3)和更多物種(見(jiàn)檢測(cè)特征"一節(jié)中的列表)中包含的所有物種。

 

該產(chǎn)品已通過(guò)廣泛的qPCR設(shè)備成功測(cè)試。試劑盒設(shè)計(jì)滿足EP 2.6.7JP G3對(duì)不同樣品材料(軟骨細(xì)胞、血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清等)提取樣品DNA后的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

 

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí),需要先收集細(xì)胞培養(yǎng)上清,如果細(xì)胞含量較低,可對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行富集。用支原體提取試劑盒,對(duì)其中的DNA進(jìn)行提取。

 

整個(gè)測(cè)試需要不到3小時(shí),并且與基于發(fā)光的酶測(cè)定、熒光染色或培養(yǎng)方法相比,不需要活的支原體細(xì)胞。值得注意的是,與幾種生化和細(xì)胞方法相比,PCR檢測(cè)被認(rèn)為在靈敏度和精度方面*。該試劑盒包含所有必要的PCR成分,包括熱啟動(dòng)Taq聚合酶,引物和dNTPs在凍干混合物(支原體混合物)以及補(bǔ)液緩沖液和PCR級(jí)水。

 

德國(guó)MB還可提供10CFU/100CFU的配套標(biāo)準(zhǔn)品,以及各類支原體基因組DNA,幫助相關(guān)項(xiàng)目完成藥典的方法學(xué)驗(yàn)證。


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