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細(xì)胞培養(yǎng)指南,這個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)千萬(wàn)要注意!

更新時(shí)間:2023-10-14  |  點(diǎn)擊率:489

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)是一項(xiàng)基礎(chǔ)但十分重要的技術(shù)。幫助科研人員再生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥物開(kāi)發(fā)等領(lǐng)域,實(shí)現(xiàn)探索生物學(xué)機(jī)理、藥物篩選、開(kāi)發(fā)治療方法等目的,并為基礎(chǔ)科學(xué)和臨床應(yīng)用提供關(guān)鍵數(shù)據(jù),幫助于我們更深入地了解生命過(guò)程,推動(dòng)醫(yī)學(xué)和生物科學(xué)領(lǐng)域的進(jìn)步。

 

在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,除了可靠的實(shí)驗(yàn)方案、嚴(yán)格無(wú)菌的環(huán)境以及規(guī)范合理的實(shí)驗(yàn)操作,還有一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn),重要但容易被忽視——高品質(zhì)的實(shí)驗(yàn)試劑?!扒蓩D難為無(wú)米之炊",實(shí)驗(yàn)試劑選擇的好與壞,直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的成敗。其中,胎牛血清作為“細(xì)胞糧食"的主要提供者,在細(xì)胞培養(yǎng)中扮演著重要的角色。

 

胎牛血清提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物;提供結(jié)合蛋白,來(lái)識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力;結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用;參與細(xì)胞貼壁;提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害;參與細(xì)胞凍存。

 

因此細(xì)胞實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,需要挑選高品質(zhì)的胎牛血清,來(lái)保障實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蝽樌M(jìn)行。在選擇胎牛血清時(shí),有以下幾個(gè)注意事項(xiàng):

 

1、胎牛血清的內(nèi)毒素含量

在挑選血清時(shí),應(yīng)關(guān)注內(nèi)毒素含量的高低。內(nèi)毒素含量高,容易引起細(xì)胞衰老、凋亡等情況,品質(zhì)高的的胎牛血清,內(nèi)毒素應(yīng)該是非常低的。因此,內(nèi)毒素可作為胎牛血清等級(jí)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)之一,內(nèi)毒素含量越低的胎牛血清,級(jí)別就越高:

內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時(shí),為特級(jí)胎牛血清;

內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時(shí),為優(yōu)級(jí)胎牛血清;

內(nèi)毒素含量≥ 25EU/ml時(shí),為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清。

目前,由于同一廠家,不同批次的血清,內(nèi)毒素?cái)?shù)值也可能有較大差異,因此很多血清廠家在名稱上已不注明級(jí)別。但使用者仍可通過(guò)檢測(cè)報(bào)告,自行甄別挑選。

 

2、胎牛血清的血源

澳洲作為無(wú)疫產(chǎn)區(qū),環(huán)境更為純凈,抗生素等藥物的使用管理也較為嚴(yán)格,因此,澳洲血源的胎牛血清,更受科研人員的偏愛(ài)。

合格的胎牛血清通常來(lái)自符合當(dāng)?shù)匦竽敛块T相關(guān)規(guī)定的的養(yǎng)殖場(chǎng)和屠宰場(chǎng),采用非侵入性或較小侵入性的采集方法。這樣可以盡可能維持血源的潔凈度,減少外部污染物的影響。

 

3、胎牛血清應(yīng)通過(guò)病原相關(guān)檢測(cè)

細(xì)胞培養(yǎng)的成功與安全性密切相關(guān),而工藝精良的胎牛血清生產(chǎn)技術(shù),可以在生產(chǎn)層面,避免胎牛血清被各類病原微生物污染。在選擇胎牛血清時(shí),科研人員往往無(wú)法直接進(jìn)入生產(chǎn)廠家,了解具體的生產(chǎn)過(guò)程,因此,應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注檢測(cè)報(bào)告中的“無(wú)菌檢測(cè)"、“病毒檢測(cè)"“病毒抗體"等相關(guān)項(xiàng)目,選擇無(wú)病原污染的的胎牛血清。

 

以科研人員常用的,Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清為例。該品牌的胎牛血清為澳洲血源,生產(chǎn)過(guò)程經(jīng)過(guò)7次無(wú)菌過(guò)濾,最后3次為0.1μm濾膜無(wú)菌過(guò)濾。

為了最終驗(yàn)證胎牛血清的無(wú)菌性,Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清還經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的病原體檢測(cè),在供應(yīng)商提供的檢測(cè)報(bào)告中,涉及有關(guān)病毒、細(xì)菌、真菌和支原體等,病原體和微生物的篩查檢測(cè)項(xiàng)目,檢測(cè)結(jié)果均為“未檢出",相應(yīng)病毒的抗體檢測(cè)各類蛋白也應(yīng)呈現(xiàn)“未檢出"的結(jié)果,確保胎牛血清的無(wú)菌性。另外,Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清的內(nèi)毒素含量也非常低,控制在3EU/ml以下,有些批次甚至 ≤ 1EU/mL,讓細(xì)胞更加健康地生長(zhǎng)繁殖。

4、胎牛血清的蛋白含量

總蛋白含量:胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,可能說(shuō)明采血的牛齡偏大,不是胎牛;數(shù)值偏低,表明血清可能摻入水或者其他溶劑。

血紅蛋白含量:標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl

免疫球蛋白:免疫球蛋白的數(shù)值能側(cè)面反映出采血的時(shí)的牛齡情況,新生牛血清中容易檢出IgMIgG的含量也偏高,胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。

需要注意的是,在檢測(cè)規(guī)范允許的范圍內(nèi),同一品牌,不同批次的胎牛血清,各類蛋白含量可能略有差異,如果實(shí)驗(yàn)中,對(duì)某些蛋白有特殊的需求,需要關(guān)注胎牛血清的檢測(cè)報(bào)告,對(duì)不同批次的血清進(jìn)行選擇。

 

因此盡量選擇能提供多批次平行試用的品牌,經(jīng)過(guò)對(duì)比篩選,Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清脫穎而出。同時(shí)儲(chǔ)備多個(gè)批次,供使用人員試用,選擇更適合自身實(shí)驗(yàn)需求的胎牛血清,試用結(jié)果滿意再進(jìn)行大批量訂購(gòu),更加省時(shí)省力省心。

 


 

綜上所述,在選擇胎牛血清時(shí),應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注胎牛血清的內(nèi)毒素含量、血源、無(wú)菌及病原檢測(cè)、蛋白含量等指標(biāo),選擇更適合自身細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)品。


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