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悄然的技術(shù)升級(jí)——凍干粉讓支原體檢測(cè)更穩(wěn)定、更靈敏

更新時(shí)間:2024-01-11  |  點(diǎn)擊率:546

隨著細(xì)胞治療等生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展,各國法規(guī)和相關(guān)機(jī)構(gòu),也逐步加強(qiáng)了,對(duì)生物制品安全性和可靠性的監(jiān)管。其中支原體檢測(cè),是一個(gè)關(guān)鍵項(xiàng)目。在各國藥典中均指出,可以使用經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證的核酸法,可替代培養(yǎng)法和指示細(xì)胞法,對(duì)相關(guān)生物產(chǎn)品進(jìn)行支原體檢測(cè)。因此,在進(jìn)行支原體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)時(shí),應(yīng)選擇通過方法學(xué)驗(yàn)證的qPCR試劑盒,兼顧靈敏度和特異性,實(shí)現(xiàn)高效且精準(zhǔn)的檢測(cè)。

 

如何實(shí)現(xiàn)檢測(cè)的高效與精準(zhǔn)

 

生物試劑,尤其是具有活性或功能的試劑,對(duì)于產(chǎn)品的劑型、儲(chǔ)存方法、運(yùn)輸溫度都有比較高的要求。

 

劑型決定了產(chǎn)品本身是否穩(wěn)定,而穩(wěn)定性又進(jìn)一步?jīng)Q定了產(chǎn)品儲(chǔ)存和運(yùn)輸甚至是使用方法的難易程度。穩(wěn)定性越好的產(chǎn)品,對(duì)于儲(chǔ)存、運(yùn)輸過程的溫度要求相對(duì)更簡單,操作難度小,產(chǎn)品則更易保留更大的活性,更容易實(shí)現(xiàn)高效且精準(zhǔn)的qPCR檢測(cè)結(jié)果。

 

qPCR液體試劑

 

用于方法驗(yàn)證的支原體檢測(cè)試劑盒以qPCR法為主。目前,市場上大多數(shù)支原體檢測(cè)類的qPCR試劑盒,其試劑多以液體劑型為主。液體液試劑的特點(diǎn)

 

實(shí)際生產(chǎn)、運(yùn)輸、使用過程中,液體試劑很容易發(fā)生失活的情況:

 

液體活性試劑需要-20℃儲(chǔ)存,在運(yùn)輸過程中,為了保持溫度,往往需要干冰運(yùn)輸,而干冰易揮發(fā),增加了運(yùn)輸難度。在使用過程中,也需要先在冰上結(jié)凍,再使用,再次增加了反復(fù)凍融帶來的失活風(fēng)險(xiǎn)。

 

qPCR凍干粉試劑

 

為了克服液體試劑的缺點(diǎn),盡可能保留生物試劑的活性不因溫度的改變而被破壞,德國MB公司的qPCR檢測(cè)試劑盒,采用了新型的凍干粉劑型。

 

凍干粉試劑由于去除水分,可以更好地保持物質(zhì)活性,防止微生物生長、減緩氧化反應(yīng),相較于液體試劑更不容易失活,更適合長期保存、遠(yuǎn)距離運(yùn)輸或高靈敏度的實(shí)驗(yàn)。

 

穩(wěn)定性強(qiáng):凍干粉試劑在制備過程中經(jīng)過冷凍和真空干燥處理,去除了水分,活性物質(zhì)處于“休眠狀態(tài)",進(jìn)而有助于提高試劑的穩(wěn)定性。避免了液體試劑可能受到環(huán)境濕度、溫度等因素的影響,容易發(fā)生降解,從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的缺點(diǎn)。

 

運(yùn)輸條件相對(duì)簡單:因此相比于液體試劑,凍干粉試劑更適合長期存儲(chǔ)和運(yùn)輸,對(duì)溫度的要求也寬松,4℃(冷鏈溫度:2-8℃)即可,減少了對(duì)冷凍設(shè)備的依賴,操作運(yùn)輸簡便且容錯(cuò)率高,避免了液體試劑保存過程中可能引起的失活可能性。

 

降低污染可能性,適合長期儲(chǔ)存和長時(shí)間運(yùn)輸,結(jié)果更可靠:由于水分被去除,也減少了其中微生物生長繁殖的可能性,降低了試劑被微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。因此,與液體試劑相比,凍干粉試劑更適合長期保存與運(yùn)輸,進(jìn)一步提高結(jié)果的可靠性。

 

降低氧化反應(yīng):水溶液的存在,容易促使一些氧化反應(yīng)的發(fā)生,從而導(dǎo)致試劑失活。凍干粉中的低水分含量有助于防止這些氧化反應(yīng)的發(fā)生,維持試劑的活性。

 

復(fù)溶后即可開始實(shí)驗(yàn),易于配制:凍干粉試劑的配制相對(duì)簡單,只需加入適量的溶劑即可重新溶解。這不僅減少了操作過程中的出錯(cuò)可能性,還降低了試劑的使用成本。相比之下,液體試劑的配制可能需要更多的步驟,而且容易受到人為誤差的影響。此外,凍干粉試劑無需冷藏,便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸,為實(shí)驗(yàn)室提供了更靈活的管理選擇。

 

綜上所述,相較于液體試劑,凍干粉試劑是qPCR實(shí)驗(yàn)中更好的選擇,尤其是在支原體檢測(cè)方法驗(yàn)證這類對(duì)于實(shí)驗(yàn)靈敏度、特異性等方面有高要求的實(shí)驗(yàn)中。然而,凍干粉試劑的制作,對(duì)于工藝的要求更高,需要保證試劑的活性不在制作過程中造成損失。市面上,德國Minerva Biolabs公司,專注于支原體qPCR凍干粉試劑(Venor Gem qEP)工藝,使用時(shí)復(fù)溶即可,盡可能保持試劑的更高活性,為支原體檢測(cè)提供更穩(wěn)定準(zhǔn)確的結(jié)果,完成高靈敏度、強(qiáng)特異性的方法驗(yàn)證,遵循歐洲藥典流程要求,已幫助國內(nèi)外眾多項(xiàng)目通過方法學(xué)驗(yàn)證。


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