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如何讓細胞更健康?清除實驗室污染很重要

更新時間:2024-04-29  |  點擊率:498

細胞培養(yǎng)的成功與否直接關系到實驗結(jié)果的準確性和可重復性。微生物污染是影響細胞培養(yǎng)健康的重要因素之一。因此,在實驗室工作和細胞培養(yǎng)過程中,高效預防或清除微生物污染十分重要。本期內(nèi)容,一起來討論細胞實驗室中,預防、清除微生物污染的好方法。

 

一、如何預防細胞實驗中的微生物污染

 

1、用科學有效的方法清潔實驗環(huán)境

我們匯總了各大實驗室的工作流程,希望可以給各位科研工作者提供參考:

 

實驗室環(huán)境定期清潔:定期使用 Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑(或濕巾),對工作區(qū)域消殺(建議半個月一次,但需根據(jù)細胞間實際使用頻率決定)。

 

實驗開始前的滅菌工作:每次實驗開始前,和實驗結(jié)束后,用紫外線對細胞間進行照射消毒,實驗操作前用酒精或Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑對操作人員的手套進行噴涂消毒。

 

實驗儀器的定期清潔:在水浴鍋或培養(yǎng)箱水槽的水中,加入 0.5% Water Shield™水槽支原體預防祛除試劑,可確保一個月內(nèi)水源不會變成支原體、真菌或細菌的污染源。液氮罐也應定期用Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑(或濕巾)進底消殺,并更換潔凈的液氮,(液氮罐中凍存的細胞發(fā)生支原體污染,也會在液氮中引起污染的傳播)。

 

2、選擇合格的實驗試劑

生物學實驗很大程度上依賴各類生物學試劑的支持,其中,胎牛血清作為一種十分常見的生物學試劑,在細胞培養(yǎng)實驗中發(fā)揮著重要作用,可以維持細胞的生長和健康。選擇高品質(zhì)的胎牛血清,能夠盡可能降低細胞污染的風險。以實驗室常用的Ausbian進口胎牛血清為例,通過經(jīng)7次加壓過濾,最后3次為0.1 µm無菌過濾處理,通過嚴格的質(zhì)量檢測,所有微生物檢測均為“未檢出",有許多實驗長期使用,為眾多科研用戶發(fā)布高水平文章提供支持。

 

3、嚴謹規(guī)范的實驗操作

實驗開始前:在正式進入細胞間前,需要在緩沖隔離間佩戴好細胞實驗室專用的防護用具:口罩、防護服、鞋套等,開始實驗前,佩戴好手套。

實驗進行中:嚴格按照實驗室的規(guī)章制度進行實驗操作,注意不要交叉污染試劑,另外實驗安全、實驗垃圾的處理也要格外注意。

實驗結(jié)束后:用Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑是所使用過的實驗臺面、物品表面進行清潔。

 

二、如何祛除細胞中的微生物污染

當細胞被細菌、真菌或是支原體污染后,都不建議繼續(xù)培養(yǎng),盡量能夠直接銷毀,并對實驗環(huán)境進行全面地清潔消毒。多數(shù)情況下,被真菌或細菌污染的細胞,“發(fā)病"迅速,還沒來得及拯救,細胞就會集體“陣亡"。因此,如果細胞十分珍貴,不能隨意丟棄,也建議僅對支原體污染的細胞進行拯救。

 

祛除細胞中支原體的有效方法:

 

1、對于非常珍貴的細胞株(不可再得的)國際上使用 Mynox® Gold珍貴細胞株支原體清除試劑,做 4 周左右的支原體祛除持續(xù)培養(yǎng)實驗。

 

2、對于非常珍貴的細胞株或生物樣品(無法長期培養(yǎng)的),可使用 Mynox®珍貴生物樣品支原體清除試劑,對細胞做 3 小時左右的祛除支原體處理,處理完畢,沖洗細胞,將樣品放入潔凈的培養(yǎng)液中,重新培養(yǎng)或保存即可。

 

3、對于已經(jīng)進行到中途的細胞實驗,如果將培養(yǎng)的大量細胞丟棄,會造成高昂的實驗成本損失。對于這樣的情況,補救辦法如下:在培養(yǎng)液中加入 10% Zell Shield®細胞支原體祛除試劑(一種新型復合抗生素)。按照廠家建議“懸浮沖洗"方法,配合處理細胞,培養(yǎng) 4 代以上,基本可祛除支原體污染。

懸浮沖洗法:

細胞消化后,將細胞轉(zhuǎn)移至離心管進行離心,棄上清,加入PBS沖洗細胞后再次速離心棄上清,重復PBS沖洗過程3次后,用新鮮的含Zell Shield®細胞支原體祛除試劑的細胞培養(yǎng)液進行培養(yǎng)傳代

Zell Shield®細胞支原體祛除試劑常規(guī)為-18℃保存,建議使用前,先融化分裝,仍舊-18℃避光保存,使用時按需融化配制。避免反復凍融。

Zell Shield®細胞支原體祛除試劑按1:100濃度可直接加入培養(yǎng)基。例如:500ml培養(yǎng)基中添加5ml Zell Shield®細胞支原體祛除試劑,50mL/瓶的Zell Shield®細胞支原體祛除試劑可供5L培養(yǎng)基使用。

 

4、一些做原代培養(yǎng)的實驗室,為了預防取原代細胞過程中可能會發(fā)生支原體污染,實驗人員也可以在培養(yǎng)液中加入 10% Zell Shield®(一種新型復合抗生素),培養(yǎng) 4 代以上,即可撤掉 Zell Shield®,此過程可有效預防支原體污染的發(fā)生。


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