在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)過程中,不僅要預(yù)防細(xì)菌污染,還有注意避免發(fā)生真菌污染。
細(xì)胞被真菌污染后,細(xì)胞生長狀態(tài)變化會(huì)發(fā)生改變。細(xì)胞生長速度通常會(huì)變慢。這是因?yàn)檎婢鷷?huì)與細(xì)胞競爭營養(yǎng)物質(zhì),同時(shí)可能產(chǎn)生對(duì)細(xì)胞有害的代謝產(chǎn)物。形態(tài)變化:雖然真菌污染初期細(xì)胞形態(tài)可能不會(huì)有明顯變化,但隨著污染的加重,細(xì)胞可能會(huì)因?yàn)闋I養(yǎng)耗盡和毒性作用而逐漸脫落死亡。
真菌污染會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)失真,甚至可能導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)失敗。如果污染嚴(yán)重且未及時(shí)處理,可能會(huì)導(dǎo)致寶貴的細(xì)胞株丟失并在實(shí)驗(yàn)室造成交叉污染,給科研工作帶來巨大損失。
在日常培養(yǎng)細(xì)胞的過程中,可以預(yù)防性添加細(xì)胞真菌抑制劑,來對(duì)細(xì)胞進(jìn)行保護(hù),以德國MB公司的Funox®為例,該試劑是一種用于培養(yǎng)基的添加劑,其中含有納他霉素,納他霉素是一種天然存在的抗菌劑,可保護(hù)細(xì)胞培養(yǎng)物免受各種常見真菌和酵母污染物的侵害。
Funox®的使用方法:
建議在兩種不同的濃度下使用該產(chǎn)品:
1、用于預(yù)防的細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑:
將 1 ml Funox® 添加到一批 500 ml 完整的即用型細(xì)胞培養(yǎng)基中(1:500 稀釋終濃度 10 μg/ml 作為預(yù)防性產(chǎn)品進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)物中)
2、消除細(xì)胞培養(yǎng)基處理(在污染的早期階段):
a) 將 2.5 ml Funox® 加入 500 ml 新鮮制備的細(xì)胞培養(yǎng)基中。
b) 通過分流或更換培養(yǎng)基,用含有 Funox® 的全培養(yǎng)基替換污染細(xì)胞培養(yǎng)物的培養(yǎng)基(1:200 稀釋,終濃度 25 μg/ml,以消除現(xiàn)有的真菌污染)
我們建議在污染晚期階段的情況下丟棄細(xì)胞培養(yǎng)物。