在生物制品和細胞治療產(chǎn)品的質(zhì)量控制中，支原體檢測是重要的一環(huán)。傳統(tǒng)的支原體檢測方法包括培養(yǎng)法和DNA染色法，然而，隨著技術(shù)的進步，核酸擴增技術(shù)（NAT）因其快速、靈敏和便捷的特點，逐漸受到行業(yè)內(nèi)的青睞。NAT法在藥典中的使用并非毫無限制，其檢測限的設(shè)定，成為了一個重要的考量因素。

NAT法檢測限的設(shè)定背景

NAT法，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和實時熒光定量PCR（qPCR），通過擴增支原體的特定核酸序列進行檢測。這種方法相較于傳統(tǒng)的培養(yǎng)法和DNA染色法，具有更高的靈敏度和更短的檢測周期。然而，靈敏度的提升也帶來了更高的假陽性風(fēng)險，因此，在藥典中設(shè)定合理的檢測限顯得尤為重要。

DNA染色法與培養(yǎng)法的差異

DNA染色法，通常使用熒光染料標(biāo)記支原體DNA，通過觀察熒光信號來判斷支原體的存在。這種方法雖然比培養(yǎng)法更快速，但其靈敏度相對較低，且容易受到其他DNA的干擾。因此，當(dāng)NAT法替代DNA染色法時，需要更高的檢測限以確保檢測的準(zhǔn)確性。

培養(yǎng)法則是通過培養(yǎng)支原體菌落來觀察其生長情況，從而判斷支原體的存在。這種方法雖然準(zhǔn)確，但耗時較長，且對實驗條件要求較高。因此，當(dāng)NAT法替代培養(yǎng)法時，其檢測限可以相對較低，因為NAT法具有更高的靈敏度，可以在更短的時間內(nèi)檢測到更少的支原體。

NAT法檢測限的具體設(shè)定

根據(jù)歐洲藥典的規(guī)定，當(dāng)NAT法替代培養(yǎng)法時，其檢測限需達到10CFU/ml；而當(dāng)NAT法替代DNA染色法時，其檢測限則需達到100CFU/ml。這一設(shè)定是基于對不同方法靈敏度和特異性的綜合考慮。

對于培養(yǎng)法而言，10CFU/ml的檢測限已經(jīng)足夠靈敏，可以確保在大多數(shù)情況下檢測到支原體的存在。而對于DNA染色法，由于其靈敏度相對較低，因此需要將NAT法的靈敏度調(diào)整至100CFU/ml來確保檢測的準(zhǔn)確性。

NAT法檢測限的驗證

為了確保NAT法檢測限的準(zhǔn)確性，需要進行嚴(yán)格的驗證。這包括使用標(biāo)準(zhǔn)品進行靈敏度測試，以及與傳統(tǒng)方法進行對比實驗。標(biāo)準(zhǔn)品通常包含已知數(shù)量的滅活支原體，可以用于評估NAT法的檢測靈敏度。同時，與傳統(tǒng)方法的對比實驗可以確保NAT法的檢測靈敏度不低于傳統(tǒng)方法。德國MB公司的10CFU和100CFU的靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品，為許多科研用戶在支原體檢測方法學(xué)驗證方面，提供了可靠的幫助。