細胞克隆率的測定是評價胎牛血清功能的兩大方法之一。本文締一生物/締一生物專家為您分析美國藥典關于胎牛血清細胞克隆率測定的描述。

　　該檢測主要是評估貼壁細胞系的*生長狀況。要分析細胞在合適生長條件下的增殖能力和單細胞的存活狀況，細胞在低密度下的接種效率或克隆形成是一個優(yōu)先選擇的方法。對于評估血清批次的品質(zhì)，這是一個非常靈敏的檢查。該技術反映出細胞群體的生長速率差異，并可區(qū)分生長速率的變化（克隆大?。┖图毎欠翊婊睿寺?shù)量）。因為存在一些細胞的不均一性，因此需記住，細胞在低密度時，要長成單獨的克隆，其生長表現(xiàn)會很不一樣。因此，即使在*生長條件下，由于細胞之間的相互作用沒有了，也很少有細胞能存活。克隆形成是一個測定細胞存活的實驗，也用于優(yōu)化細胞培養(yǎng)條件（培養(yǎng)基和血清的選擇）。如果能證實一個克隆來自一個細胞，那么克隆效率就可以確定下來。

　　樣本：對于每個血清批次，加20mlFBS到180mlEMEM中，0.22mm過濾除菌，4℃保存。

　　細胞制備：該實驗只用于貼壁細胞 （如HFL1 and Mv 1 Lu）。一周前開始制備，2-3天換液。具體制備請參考文章《如何準備用于生長促進曲線測定的細胞》。

　　分析：以低密度接種細胞（2–50個細胞/cm2），接下來固定，染色，計數(shù)。

　　1、對每個細胞系和每個批次血清，標記10個直徑60mm的平皿。標記在平皿的側(cè)壁靠下部分，包括對照。

　　2、每個平皿加入5ml含10%待測FBS的培養(yǎng)基，加入400個細胞。

　　3、在細胞培養(yǎng)箱中37℃，5%CO2孵育10-14天。

　　4、棄掉上清，加入足量石炭酸復紅-亞甲基藍溶液，覆蓋每個平皿，作用10分鐘。

　　5、棄掉染液，用蒸餾水沖洗幾遍。平皿倒置在吸水紙巾上，風干。

　　計數(shù)并記錄陽性克隆數(shù)，以及陽性染色克隆的總表面積（mm2）。計算均值和標準差。

　　接受標準：接種效率%=克隆數(shù)÷接種細胞數(shù)×100，比較FBS批次之間的結(jié)果，選擇一個好的批次用于某個特定細胞的培養(yǎng)。

　　綜上所述，您是不是已經(jīng)對美國藥典關于胎牛血清細胞克隆率測定的描述，有所了解。如果還有其他疑問，請咨詢締一生物/締一生物資深專家。