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口腔支原體與肺炎支原體標(biāo)準(zhǔn)品的應(yīng)用

更新時(shí)間:2021-01-06  |  點(diǎn)擊率:882

我國藥典規(guī)定:“主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、病毒種子批、對(duì)照細(xì)胞以及臨床治療用細(xì)胞進(jìn)行支原體檢查時(shí),應(yīng)同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)法和指示細(xì)胞培養(yǎng)法(DNA染色法)。病毒類疫苗的病毒收獲液、原液采用培養(yǎng)法檢查支原體。”

培養(yǎng)法所用的支原體培養(yǎng)基,在使用前需進(jìn)行靈敏度檢查,這時(shí)需要用到國家藥品檢定機(jī)構(gòu)分發(fā)的肺炎支原體(ATCC 15531株)和口腔支原體(ATCC 23714株)。在指示細(xì)胞培養(yǎng)法中,它們還可作為陽性對(duì)照。

在上,支原體核酸擴(kuò)增技術(shù)(PCR/qPCR)由于具有操作簡單、節(jié)約時(shí)間、靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)勢,越來越多地用于制藥工業(yè)的支原體檢查。但如要替代培養(yǎng)法,其靈敏度需達(dá)到10CFU/ml;如要替代DNA染色法,其靈敏度需達(dá)到100CFU/ml,以防止發(fā)生漏檢。

為驗(yàn)證支原體PCR/qPCR法的靈敏度,德國MB公司提供滅活支原體的靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品,經(jīng)過10CFU或100CFU嚴(yán)格標(biāo)定,可用于支原體核酸擴(kuò)增法的方法驗(yàn)證。

一、產(chǎn)品信息

 


 

 

二、產(chǎn)品特點(diǎn):

1. 支原體株來自英國菌種保藏中心NCTC。

2. 傳代次數(shù)少,支原體無變異。

3. 產(chǎn)品為凍干粉,保證其穩(wěn)定性。

4. 分析證書(COA)提供該批次GU:CFU比值(支原體基因組/菌落數(shù)比值)。

5. 支原體已滅活,保障細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室安全。

三、操作步驟

步驟1. 離心,收集標(biāo)準(zhǔn)品凍干粉至管底。

步驟2. 每個(gè)管中添加1ml你的樣品基質(zhì)。

步驟3. 室溫孵育5分鐘。

步驟4. 渦旋振蕩10秒,再離心10秒。

步驟5. 繼續(xù)DNA抽提。推薦使用德國MB公司提供的支原體DNA提取試劑盒(英文名:Venor®GeM Sample Preparation Kit,貨號(hào)56-1010/-1050/-1200)。

步驟6. 抽提的DNA用于PCR/qPCR擴(kuò)增。

我國《CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點(diǎn)》支原體檢查部分指出:

“選用商品化的檢測試劑,在使用前也需確認(rèn)其檢出限不低藥典方法。在早期使用時(shí),應(yīng)與藥典方法平行進(jìn)行,在獲得充分的比對(duì)數(shù)據(jù)后才有可能替代藥典方法。”

以往已有肺炎支原體和口腔支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株,用于培養(yǎng)法的靈敏度檢查。但對(duì)于PCR/qPCR支原體核酸檢測法,國內(nèi)尚沒有用于靈敏度驗(yàn)證的支原體菌株標(biāo)準(zhǔn)品。德國MB公司長期專注支原體產(chǎn)品的開發(fā)和支原體的防控,具有二十多年的經(jīng)驗(yàn),其所提供的10CFU和100CFU支原體靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品被各大藥廠廣泛使用,很好地彌補(bǔ)了這一空白,使得核酸檢測法與培養(yǎng)法可以平行開展和比較結(jié)果,有助于對(duì)核酸檢測法進(jìn)行方法驗(yàn)證,為廣大藥廠帶來了方便。

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